|
Iniciació
a la bromatologia (pràctiques)
|
Protocols
d'anàlisi
|
Ref:
19.1
|
|
CAROTENS
I XANTOFILES EN PEBRE ROIG
|
pdf
 |
|
OBJECTE I FONAMENTS
Els colorants naturals vegetals
carotens i xantofiles presenten una retenció selectiva sobre alúmina.
La concentració de carotens o xantofiles de cada fracció
es determina espectrofotomètricament.
MATERIAL
Balança analítica.
Columna cromatogràfica amb sistema de buit, segons esquema
adjunt, de uns 2 cm de F.
Embut cònic.
Embut petit per sòlids.
Flascó rentador.
Matràs aforat de 100 ml.
Matrassos aforats de 50 ml (2)
Pesasubstàncies.
Pipeta aforada de 1 ml.
Pipeta aforada de 2 ml.
Pipetes aforades de 25 ml.
Pipetes aforades de 5 ml.
Pipetes graduades de 5 i 10 ml.
Provetes de 100 i 50 ml.
Espectrofotòmetre
Cubetes per espectrofotòmetre
REACTIUS
Aigua destil·lada.
Alúmina per cromatografia en columna, activitat mitjana.
Dissolució de Na2SO4
al 10 % (dissoldre 50 grams de sulfat de sodi pa fins a 500 ml en aigua)
Dissolució patró de Sudan I (dissoldre 0'1241 grams
de Sudan I pa en 500 ml d'acetona-isopropanol(1/1) pa).
Dissolvent HAET (hexà, acetona, etanol i toluè, tots
de qualitat pa, en les proporcions 10/7/6/7).
Hexà pa.
Hexà-acetona 90/10 (qualitat pa en les proporcions indicades).
Hexà-acetona 96/4 (qualitat pa en les proporcions indicades).
Hexà-acetona-metanol 80/10/10 (qualitat pa en les proporcions
indicades).
KOH al 40 %, dissolució metanòlica (dissoldre 47'1
grams d'hidròxid de potassi pa del 85% en alcohol metílic
fins a 100 ml, i filtrar amb placa porosa si es presenta residu insoluble).
Na2SO4 anhidre pa.
METODOLOGIA
1.- Pesar exactament al voltant
de 0'5 grams de farina de pebre roig i passar a un matràs aforat
de 100 ml.
2.- Pipetejar 30 ml de dissolvent HAET en el matràs aforat;
tapar i sacsejar 1 minut.
3.- Afegir 1 ml d'aigua, tapar, sacsejar 1 minut i deixar reposar
16 hores a les fosques.
4.- Afegir 2 ml de dissolució metanòlica de KOH al
40 %, agitar 1 minut i deixar reposar 1 hora a les fosques.
5.- Afegir, amb pipeta, 30 ml d'hexà, agitar 1 minut i afegir
dissolució de Na2SO4
al 10 % fins omplir part del coll del matràs (no cal arrasar exactament);
tapar i sacsejar amb energia durant 2 minuts.
6.- Deixar reposar 1 hora a les fosques.
7.- Preparar una columna cromatogràfica al buit segons l'esquema.
Omplir-la fins 10-12 cm amb alúmina, posant l'alúmina en
petites capes i trepitjar-les amb suavitat; posar-hi pel damunt una capa
de 1 cm de sulfat de sodi anhidre.
8.- Posar 5 ml de la capa superior (zona del coll) del matràs
a la columna; fer buit molt suau fins que quedin els 5 ml absorbits a
la part superior de la columna.
9.- Passar per la columna hexà-acetona(96/4), fins que comenci
a sortir líquid per la part inferior de la columna.
10.- Passar hexà-acetona(90/10) fins eluïr la banda
de carotens, arreplegant el líquid en un matràs aforat de
50 ml; portar a volum amb el dissolvent hexà-acetona(90/10) i homogeneïtzar.
11.- Passar hexà-acetona-metanol(80/10/10) fins eluïr
la banda de les xantofiles, arreplegant el líquid en un matràs
aforat de 50 ml; portar a volum amb el mateix dissolvent i homogeneïtzar.
12.- Llegir en espectrofotòmetre l'absorbància de
la dissolució de carotens a 435 nm i la de la dissolució
de xantofiles a 475 nm, enfront d'un blanc dels dissolvents emprats en
cada cas.
Determinació dels factors
de correcció de l'espectrofotòmetre
1.- Recalibrar l'espectrofotòmetre de manera que entre 470
i 480 nm, l'absorbància de la dissolució patró de
Sudan I (acabada de preparar), tingui el màxim d'absorbància
a 475 nm.
2.- Determinar l'absorbància de la dissolució extemporània
de patró de Sudan I, a 435 nm i a 475 nm i calcular els factors
de correcció.
CÀLCULS
El resultat s'expressa en mil·ligrams/Kg (ppm):
expressions en les quals:
A435 = Absorbància a 435 nm.
A474 = Absorbància
a 475 nm.
Vf = Volum final de la porció eluïda.
Vd = Volum de la porció que es passa
per columna.
F435 = Factor de correcció espectrofotomètric
a 435 nm.
F475 = Factor de correcció espectrofotomètric
a 475 nm.
m = pes de la mostra en grams.
Els valors del factors de correcció són:
a on els Ao són les absorbàncies de la dissolució
patró de Sudan I.
OBSERVACIONS
El mètode és
aplicable, canviant la quantitat a pesar i els volums d'elució
i d'arrasament dels eluïts, per alfals deshidratat, moresc, curri
i pinsos de contingut gras no excessivament alt.
Qüestionari 19.1.- Carotens i xantofiles en pebre roig
1.- Deduir raonadament les fórmules utilitzades en els càlculs (considerant que l'activitat òptica del Sudan I en les condicions esmentades equival a la de 255 mg de carotens i 212 mg de xantofiles, considerant les elucions fins el punt 9).
2.- Quin objectiu té
l'addició de KOH (subapartat 4 de la metodologia)?
3.- Per quin motiu es deixa reposar la mostra a les fosques en
els punts 3, 4 i 6 de la metodologia?
4.- Fer l'esquema gràfic del procediment analític.
5.- Confeccionar el corresponent "butlletí d'anàlisi".