SEPARACIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS POR CROMATOGRAFÍA DE PAPEL


OBJETIVO.


Aislar y identificar, con técnicas cromatográficas, los pigmentos presentes en las frondes de las lentejas de agua.

MATERIAL Y MÉTODOS.

  1. Preparar una tira de papel especial para cromatografía Watman n° 1 de 16 cm de longitud y 2 cm de anchura.
  2. Hacer un agujero a 1 cm de la parte superior y recortar en punta la parte inferior de la tira.
  3. Chafar suavemente algunas frondes de Lemna minor sobre la tira de papel cromatográfico a 2.5 cm del extremo inferior.

  4. Eliminar los restos de frondes adheridas al papel.
  5. Colgar el papel por el agujero a un gancho metálico pasado a través del agujero central del tapón de goma.
  6. Situar el papel dentro del tubo de ensayo en el cual previamente habremos depositado 5 cc del diluyente (éter de petróleo 85%, acetona 10% y benceno 5% v/v ).

Una vez tapado el tubo de ensayo con el papel cromatográfico en su interior, de forma que la punta del extremo inferior esté en contacto con el diluyente, lo dejamos 20 minutos en reposo. Pasado este tiempo sacamos el papel cromatográfico y observamos los resultados.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los diferentes pigmentos presentes en las frondes de las lentejas de agua han avanzado a diferentes velocidades según sus características físicoquímicas y su afinidad con el eluyente. De esta manera pudimos apreciar cinco zonas claramente separadas :

  • una primera zona de color marrón situada en el lugar donde habíamos situado la muestra. Esta mancha corresponde a los antocianos que al no ser solubles al diluyente utilitzado no se han movido.
  • una segunda zona desplazada 2.3 cm respecto del lugar donde habíamos depositado la muestra que presenta un color verde y que corresponde a la clorofila B.
  • una tercera zona desplazada 4 cm respecto del lugar donde habíamos depositado la muestra de color verde y que corresponde a la la clorofila A .
  • una cuarta zona desplazada 6.5 cm respecto del lugar donde habíamos depositado la muestra que presenta un color amarillo y que corresponde a las xantofilas.
  • una quinta zona desplazada a 9.3 cm respecto del lugar donde habíamos depositado la muestra de color amarillo y que corresponde a los ß-carotenos.
  • una sexta zona desplazada 11 cm respecto del lugar donde habíamos depositado la muestra que corresponde al frente del eluyente.


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