| |
INVESTIGANT MT : ESCLAUS GENÈTICS I ESPECTRES
El millor per a estudiar les MT és fer servir esclaus que treballin per a nosaltres. Concretament, esclaus genètics.
Mitjançant enginyeria genètica, aconseguim introduir el gen que codifica per la MT que volem estudiar dins un bacteri. I no només això. Aconseguim que el bacteri es pensi que aquest gen és seu, i que fabriqui la proteïna per a nosaltres. El bacteri s'ha convertit en el nostre esclau genètic i anirà fabricant la MT mentre visqui.
D'aquest sistema d'obtenció de proteïnes se'n diu proteïna heteròloga.
Per aconseguir que la MT que fabriquem uneixi diferents metalls, afegim al medi un metall o un altre: Zenc, Cadmi, Coure,... Quan ja tenim suficient proteïna, trenquem les membranes dels bacteris, i recuperem les MT fabricades in vivo mitjançant diferents cromatografies.
El resultat és una mostra de gran puresa i concentració amb MT amb metalls units dins la cèl·lula, és a dir, in vivo.
I què en fem de les MT amb metalls que obtenim? Estudiem de quina manera estan units els metalls, si la MT està molt estructurada o no, etc... |
|
Primer de tot, "comptem" quans metalls uneix la MT que hem purificat. Això ho fem amb dues tècniques, anomenades Espectroscòpia d'Emissió Atòmica de Plasma Acoblat per Inducció (ICP-AES) i Espectrometria de Masses (ESI-MS). Mentre la primera "compta" els diferents tipus d'àtoms que hi ha a la mostra, la segona medeix les proteïnes, és com si "peséssim" la MT.
Tot seguit, estudiem si la proteïna està ben estructurada al voltant dels metalls que uneix mitjançant el Dicroisme Circular. Aquests espectres són com una fotografia de l'ombra de la proteïna, permeten saber més o menys (però no amb exactitud) què hi ha dins.
Aquests anàlisis els fem també amb MT amb Zenc a les que, in vitro, els anem afegint Coure o Cadmi. L'objectiu és veure què passa quan la MT substitueix un metall per un altre.
Altres tècniques més concretes, com la Cromatografia de Gasos acoblada a Detector Fotomètric de Flama (GC-FPD), o l'espectroscòpia Raman i l'espectroscopia IR ens permeten obtenir informacions acurades sobre el contingut i constitució de les MT amb metalls: la participació de Histidines, l'estructura secundària, etc...
Quan hem acabat tot això, comparem les seqüències de les diferents MT que estudiem i intentem obtenir respostes a algunes preguntes difícils, com ara:
Què fa que les diferents MT es comportin com ho fan? Quina feina fan dins de cada organisme? Com s'han originat evolutivament les diferents MT? Podem fer-les servir per alguna cosa? En podem dissenyar de noves?
|
|
 |
|