El dia 22 de desembre de 2005, vam visitar
amb la meva tutora al Dr. Joan Fibla, professor i investigador
de la Facultat de Medicina de la Universitat de Lleida.
Allà tenen tots els aparells
necessaris per a fer la PCR i la seqüenciació de
l’ADN, i vam poder fer les pràctiques
necessàries.
Cal dir, que uns dies abans cal demanar els primers
o encebadors, ja que per a cada seqüència
són
diferents.
Els primers els vam fer amb l’ajut d’una pàgina
web (Primer 3) que els elabora a partir de la cadena que
t’interessa i te n’ofereix quatre parells diferents
per a assegurar la màxima precisió a l’hora
de fer l’experiment. Aquest quatre parells de primers
són els següents:
Tot seguit, vam fer la preparació de les mostres
a partir de cèl·lules de la mucosa bucal
de la persona que estudiem i vam continuar seguint
el protocol pertinent (Metodologia - Problema 3).
El següent pas era fer la PCR. Per a fer-la cal
programar el protocol a la màquina i introduir
els tubs amb les mostres. Les imatges següents són
les de la màquina de PCR i les del resultat que
se n’obté un cop acabat el procés.
| 1.
|
Primer esquerra
gaaactgggcatgtggagac
Primer dret
tgatgcaatcattcgtctgtt |
2.
|
Primer esquerra
aactgggcatgtggagacag
Primer dret
aacgatcctgagacttccaca |
| 3.
|
Primer esquerra
caatagaaactgggcatgtgg
Primer dret
tcattcgtctgtttcccattc |
4.
|
Primer esquerra
ccaatagaaactgggcatgtg
Primer dret
tcattcgtctgtttcccattc |
Tot seguit, vam fer la preparació de les mostres
a partir de cèl·lules de la mucosa bucal
de la persona que estudiem i vam continuar seguint el
protocol pertinent (Metodologia -
Problema 3).
El següent pas era fer la PCR. Per a fer-la cal
programar el protocol a la màquina i introduir
els tubs amb les mostres. Les imatges següents són
les de la màquina de PCR i les del resultat que
se n’obté un cop acabat el procés.
Imatge 64: Màquina
de PCR
Imatge 65: Resultat
de la nostra PCR |
 |
|
Un cop separada en un gel d’agarosa la nostra mostra,
el següent pas és la seqüenciació a
partir de la PCR. Les imatges següents pertanyen a
l’aparell que s’utilitza per a la seqüenciació de
l’ADN mitjançant una electroforèsi
capil·lar. El gràfic de més avall és
el que s’obté com a resultat d’ampliar
la zona que ens interessa de la seqüència
obtinguda.
 |
Imatge
66: Muntatge de la màquina
que s’encarrega de seqüenciar l’ADN
per mitjà d’electroforèsi
capil·lar, un sistema de làser
i un l’ordinador que s’encarrega
de rebre i processar la informació. |
 |
Imatge 67: Interior
del seqüenciador. Darrera de la tapa de la
dreta, es troba el sistema de capil·lars. |
Imatge
68: Seqüència
resultant del nostre experiment. Trobem amplificada
la secció que ens interessa i podem observar
la mutació puntual que es dóna en el
codó 39 de la cadena de la beta globina.
